勞拉替尼：Lorlatinib 是一種有效的，ALK/ROS1 雙抑制劑，抑制 ROS1，野生ALK 和 突變ALK (L1196M) 的 Ki 分別為0.02 nM，0.07 nM 和 0.7 nM
相關(guān)類別：
信號(hào)通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> ALK
研究領(lǐng)域 >> 癌癥
靶點(diǎn)：Ki: < 0.02 nM (ROS1), < 0.07 nM (ALK WT), 0.7 nM (ALK L1196M)
體外研究：Lorlatinib顯示出顯著的抗ALK細(xì)胞活性和大量ALK臨床突變，IC50范圍為0.2 nM-77 nM [1]。 Lorlatinib在攜帶SLC34A2-ROS1融合體的HCC78人NSCLC細(xì)胞和表達(dá)人CD74-ROS1的BaF3-CD74-ROS1細(xì)胞中顯著抑制細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[2]。 Lorlatinib還顯示出有效的生長抑制活性，并在攜帶非突變ALK或突變ALK融合的NSCLC細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
體內(nèi)研究：在大鼠中，Lorlatinib顯示低血漿清除率，中等分布容量，合理的半衰期，p-糖蛋白1介導(dǎo)的外排傾向低，生物利用度為100％[1]。在體內(nèi)，Lorlatinib通過抑制ROS1磷酸化和下游信號(hào)分子，以及抑制腫瘤中細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1，在表達(dá)人CD74-ROS1和Fig-ROS1的NIH3T3異種移植模型中顯示出細(xì)胞減少的抗腫瘤效力[2]。在體內(nèi)，Lorlatinib還在攜帶表達(dá)EML4-ALK，EML4-ALK-L1196M，EML4-ALK-G1269A，EML4-ALK-G1202R或NPM-ALK的腫瘤異種移植物的小鼠中顯示出顯著的抗腫瘤活性
激酶實(shí)驗(yàn)：使用桿狀病毒表達(dá)在內(nèi)部產(chǎn)生重組人野生型和突變ALK激酶結(jié)構(gòu)域蛋白（氨基酸1093-1411），通過用MgATP自身磷酸化預(yù)活化，并使用微流體遷移率變動(dòng)分析測定激酶活性。該反應(yīng)含有1.3nM野生型ALK或0.5nM突變ALK（適于在反應(yīng)1小時(shí)后產(chǎn)生15-20％的肽底物磷酸化），3μM5-FAM-KKSRGDYMTMQIG-CONH2），5mM MgCl2，和在pH7.1的25mM Hepes中的Km水平的ATP。通過動(dòng)力學(xué)和晶體學(xué)研究顯示抑制劑具有ATP競爭性。通過將轉(zhuǎn)化率（％）擬合到競爭性抑制方程來計(jì)算Ki值。除了使用0.25nM重組人ROS1催化結(jié)構(gòu)域（氨基酸1883-2347）之外，如上文針對(duì)ALK所述測定ROS1酶。使用206-激酶組評(píng)估激酶抑制劑選擇性
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：將細(xì)胞接種在含有10％FBS的生長培養(yǎng)基中的96孔板中，并在37℃下培養(yǎng)過夜。第二天，將Lorlatinib的連續(xù)稀釋液或適當(dāng)?shù)膶?duì)照加入指定的孔中，并將細(xì)胞在37℃下孵育72小時(shí)。進(jìn)行CellTiter-Glo測定以確定相對(duì)細(xì)胞數(shù)。通過使用四參數(shù)分析方法的濃度 - 響應(yīng)曲線擬合來計(jì)算IC 50值
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：如前所述，通過顱內(nèi)立體定向注射Adeno-Cre，在LSL-FIG-ROS1; Cdkn2a - / - ; LSL-Luc小鼠中開始新生GBM腫瘤發(fā)生。如下所述使用BLI監(jiān)測腫瘤發(fā)展。一旦腫瘤達(dá)到給定的大?。?07 p-1·s-1·cm-2·sr-1），動(dòng)物隨機(jī)進(jìn)入載體對(duì)照或用指定劑量的Lorlatinib進(jìn)行3,7或14 d治療。通過sc植入的Alzet滲透泵給藥。處理后，殺死小鼠，顯微切割GBM腫瘤，并將組織在液氮中快速冷凍。處理剩余的大腦用于組織學(xué)
密度：1.4±0.1 g/cm3
沸點(diǎn)：675.0±55.0 °C at 760 mmHg
分子式：C21H19FN6O2
分子量：406.413
閃點(diǎn)：362.1±31.5 °C
精確質(zhì)量：406.155365
PSA：110.06000
LogP：1.24
蒸氣壓：0.0±2.1 mmHg at 25°C
折射率：1.687
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