氧化苦參堿檢測(cè)方法是什么

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來源：CPhI制藥在線

2018-03-26

苦參是一種臨床常用的中藥材，具有燥濕、清熱、殺蟲、祛風(fēng)、利尿等功效，苦參的入藥部分為根部，主要成分為苦參堿以及氧化苦參堿

苦參是一種臨床常用的中藥材，具有燥濕、清熱、殺蟲、祛風(fēng)、利尿等功效，苦參的入藥部分為根部，主要成分為苦參堿以及氧化苦參堿。氧化苦參堿具有利尿、抗病原體、免疫作用，有研究發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿對(duì)肺癌、胃癌細(xì)胞誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖具有抑制作用，還有抗乙型肝炎病毒作用那么，氧化苦參堿檢測(cè)方法是什么？

氧化苦參堿

由于目前臨床上的苦參產(chǎn)地各異，所以質(zhì)量也各不相同，為了更好的對(duì)苦參質(zhì)量進(jìn)行鑒別和管理，本文建立高效液相色譜法對(duì)中藥苦參藥材中的苦參堿和氧化苦參堿的含量進(jìn)行測(cè)定，并且對(duì)該實(shí)驗(yàn)方法的精密度，重復(fù)性，穩(wěn)定性等方面進(jìn)行實(shí)驗(yàn)考察。

一、儀器與試藥：

（1）實(shí)驗(yàn)儀器：高效液相色譜儀（LC-2010C），電子分析天平（92SM），超聲儀（5150A），色譜工作站。

（2）實(shí)驗(yàn)試藥：中藥樣品苦參藥材（產(chǎn)地山西），苦參堿和氧化苦參堿的對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢定所），水（超純水）；色譜純乙腈；其他試劑均為分析純。

二、方法

（1）對(duì)照品溶液制備方法：精密稱取苦參堿5.0mg和氧化苦參堿5.0mg，分別放置到5mL的容量瓶中，先加入適量的乙腈（80）-乙醇（10）-3%磷酸溶液（10）將其分別溶解，再稀釋至刻度線，搖勻即制備成了1.0mg每毫升的兩種對(duì)照品實(shí)驗(yàn)溶液儲(chǔ)備液[3]。

（2）供試品溶液制備方法：取中藥樣品苦參藥材適量，使用剪刀盡量剪碎后精密稱取51.00mg，再加入70%的乙醇溶液40mL，在90℃的溫水浴中進(jìn)行有效成分提取，每次2h，合并兩次提取液，過濾后，精密移取儲(chǔ)備液1mL通過2g，直徑為1cm的中性氧化鋁柱，再依次使用4mL三氯甲烷和4mL三氯甲烷（7）∶甲醇（3）進(jìn)行洗脫，收集實(shí)驗(yàn)洗脫液回收溶劑后，再加入適量的乙醇溶液進(jìn)行溶解，轉(zhuǎn)移至25mL的容量瓶中加入乙醇稀釋至刻度即成供試品溶液儲(chǔ)備液，在進(jìn)樣前使用微孔濾膜進(jìn)行濾過。

（3）色譜條件設(shè)定：色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈（80）-乙醇（10）-3%磷酸溶液（10）；流速為（1.0mL/min）；檢測(cè)波長(zhǎng)（210nm）；進(jìn)樣量（每次進(jìn)樣10μL）；柱溫為（30℃）。

（4）線性關(guān)系考察：分別精密吸取苦參堿和氧化苦參堿兩種對(duì)照品儲(chǔ)備液溶液，使用流動(dòng)相進(jìn)行稀釋，分別制成0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μg/mL濃度的兩種對(duì)照品溶液。分別進(jìn)樣10μL進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖，以色譜峰面積做為縱坐標(biāo)(Y)，以對(duì)照品溶液的濃度做為橫坐標(biāo)(X)，分別進(jìn)行線性回歸，得出回歸方程。

（5）精密度的實(shí)驗(yàn)：分別取6份同一批次的苦參藥材樣品，按“供試品溶液制備方法”分別進(jìn)行制備，在“色譜條件設(shè)定”下，進(jìn)樣檢測(cè)，記錄測(cè)量出的色譜峰面積，平行測(cè)定苦參堿以及氧化苦參堿的含量。

（6）穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)：分別取精密吸取同一批制備苦參藥材的供試品溶液10μL，分別在0.5h，1h，2h，4h，8h，12h，24h分別按“色譜設(shè)定條件”進(jìn)樣進(jìn)行測(cè)定，記錄分別測(cè)得的色譜峰面積。

（7）重復(fù)性的實(shí)驗(yàn)：分別取同一批次制備的供試品溶液，重復(fù)按“色譜設(shè)定條件”進(jìn)樣6次測(cè)定，記錄色譜圖，考察重復(fù)性情況。

（8）加樣回收實(shí)驗(yàn)：準(zhǔn)確稱取6份苦參藥材樣品，分別加入苦參堿和氧化苦參堿的對(duì)照品溶液，按“供試品溶液制備方法”分別制備，取各樣品溶液10μL進(jìn)樣檢測(cè)，記錄色譜圖，計(jì)算平均值，計(jì)算出回收率。

（9）樣品含量測(cè)定：取苦參藥材6份，按“供試品溶液制備方法”項(xiàng)下進(jìn)行供試品制備，分別“色譜條件設(shè)定”項(xiàng)下進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算苦參堿和氧化苦參堿的含量。

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