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潑冷水?Nature:單堿基編輯會(huì)導(dǎo)致RNA脫靶變異

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作者:符蘇  來源:生物探索
  2019-04-22
2016年,來自哈佛大學(xué)/Broad研究所的David R. Liu教授團(tuán)隊(duì)在《Nature》上發(fā)表了一項(xiàng)突破性成果——改造CRISPR-Cas9技術(shù),研發(fā)出首個(gè)可編輯DNA單個(gè)堿基“魔剪”技術(shù)CBE(Cytosine Base Editor),可以將C-G堿基對(duì)轉(zhuǎn)變成T-A堿基對(duì)。

       2016年,來自哈佛大學(xué)/Broad研究所的David R. Liu教授團(tuán)隊(duì)在《Nature》上發(fā)表了一項(xiàng)突破性成果——改造CRISPR-Cas9技術(shù),研發(fā)出首個(gè)可編輯DNA單個(gè)堿基“魔剪”技術(shù)CBE(Cytosine Base Editor),可以將C-G堿基對(duì)轉(zhuǎn)變成T-A堿基對(duì)。時(shí)隔一年,該團(tuán)隊(duì)再次升級(jí),獲得可將A-T堿基對(duì)轉(zhuǎn)變成G-C堿基對(duì)的堿基編輯器ABE(Adenine Base Editor)。

       相比于傳統(tǒng)切割DNA雙鏈的CRISPR/Cas9技術(shù)相比,單堿基編輯器以脫氨酶來修飾特定的核苷酸,從而可靶向特定DNA(例如將胞嘧啶改變?yōu)樾叵汆奏ぃ?,其編輯效果更為精?zhǔn),所以在疾病治療、缺陷修復(fù)上被寄予了更大的希望。

       然而現(xiàn)在,一樣是發(fā)表在《Nature》期刊上的一項(xiàng)新研究卻表明,單堿基編輯同樣面臨“脫靶”風(fēng)險(xiǎn),會(huì)造成RNA突變。這可能會(huì)增加基于該技術(shù)的療法的風(fēng)險(xiǎn)和復(fù)雜性,并妨礙其他應(yīng)用。

       CRISPR技術(shù)有很大的潛能,但是也存在很多潛在的安全問題,其中最為突出的就是脫靶效應(yīng)(即編輯范圍之外的DNA),但是過去的研究并沒有探究其對(duì)RNA的影響。

       在這項(xiàng)新研究中,來自麻省總醫(yī)院的病理學(xué)家和分子生物學(xué)家J. Keith Joung和團(tuán)隊(duì)篩選了常見的單堿基編輯系統(tǒng),將其應(yīng)用于人類肝 臟和腎 臟細(xì)胞。結(jié)果顯示,脫氨酶會(huì)改變RNA,將其胞嘧啶(cytosines)轉(zhuǎn)變成尿嘧啶(uracil),從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)編碼和非編碼序列的突變。而且這種突變數(shù)量是成千上萬的。

       “這個(gè)結(jié)果提醒我們,當(dāng)考慮基因編輯的脫靶效應(yīng)時(shí),需要考慮得不僅僅是遺傳改變。” J. Keith Joung強(qiáng)調(diào)道。他們并不認(rèn)為這是給單堿基編輯器潑冷水,而是提醒改良版的CRISPR-需要進(jìn)一步完善才能安全地應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床。

       欣慰的是,Keith Joung團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn),通過優(yōu)化兩種單堿基編輯的關(guān)鍵酶,可以大大減少RNA脫靶效應(yīng),將RNA變異率減少390倍和3800倍。而且,這些改良酶表現(xiàn)出更精準(zhǔn)的DNA編輯效率。

       David R. Liu教授對(duì)此表示,他自己的實(shí)驗(yàn)室也對(duì)RNA脫靶效應(yīng)進(jìn)行了水平,發(fā)現(xiàn)其變異水平低于Keith Joung研究的水平。他認(rèn)為,一些差異可能與分析方式有關(guān),而不是單堿基編輯的真實(shí)差異。“或許我們可以設(shè)計(jì)僅適用于RNA或者DNA的堿基編輯。”他預(yù)期道。

       參考資料:

       [1] Transcriptome-wide off-target RNA editing induced by CRISPR-guided DNA base editors

       [2] Base Editors Cause Off-Target Mutations in RNA

       [3]Powerful CRISPR cousin accidentally mutates RNA while editing DNA target

       [4]CRISPR base editors can induce wide-ranging off-target RNA edits

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