重組腸激酶
Cat.No.: REK08
CAS: 9017-74-8
EC: 3.4.21.9
儲存溫度：-20℃或以下
來源：重組牛腸激酶，大腸桿菌表達
蛋白序列：氨基酸序列與牛腸激酶輕鏈一致。
1.產品簡介
雅心重組牛腸激酶是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段。該酶經HPLC純化，純度高，特異性高，不含其他蛋白酶。腸激酶可以切割含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端肽鍵：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸（DDDDK）?？梢栽谳^寬pH范圍（4.5-9.5）和較寬溫度范圍內有效切割融合蛋白。腸激酶可去除位于蛋白質N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標簽。
2.產品特性
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來源 |
重組大腸桿菌 |
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外觀 |
澄清、無色至淡黃色液體 |
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活性 |
≥ 5.0 U/µl |
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純度（蛋白電泳） |
單一主條帶 |
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電泳（分子量） |
25.8 ±2.6 kDa |
單位定義：1U定義為在25℃，12h~16h之內，將0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 緩沖液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。
3.推薦使用方法
1）25℃酶切條件： 
按照酶活性定義，酶切條件舉例：
25mM Tris-HCl 8.0體系中：
融合蛋白 0.1-1mg/ml（蛋白總量50-100µg）
重組EK 0.1-0.2U
25℃過夜酶切，或完全酶切需16-24h，用SDS-PAGE檢測酶切效果。
2）4℃低溫酶切條件：
4℃能對底物進行有效酶切，但需要將酶切時間延長至48-64h，或增加2-3倍酶量。
3）酶切優(yōu)化和放大
優(yōu)化：可以對酶切條件進行優(yōu)化，例如緩沖液pH，融合蛋白濃度，EK的量，以及酶切 時間，使融合蛋白能在穩(wěn)定條件下被酶切，用SDS-PAGE檢測酶切效果。
放大：選擇優(yōu)化后的反應條件，按該條件等比例放大，用SDS-PAGE檢測酶切效果。
4.常見影響腸激酶活性的因素
在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影響?？蓞⒄找韵峦扑]方法進行酶切：
1）為獲得理想酶切結果，請將樣品透析到25mM Tris-HCl 8.0緩沖液中，再進行酶 切。
2）若不便透析，可將樣品稀釋，咪唑含量在100mM以下，NaCl濃度在50mM以下，甘油 濃度小于5%以下進行酶切，酶的用量與蛋白的比例不變（即1U酶切500µg蛋白）。
3）如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種，且不便去除，此時適當增加酶量 或延長酶切時間，也可達到較好酶切效果。
5.儲存和運輸穩(wěn)定性
酶液儲存穩(wěn)定性：-20℃，24個月穩(wěn)定；25℃，一周內，無活性損失。
緩沖體系：50mM Tris-HCl，pH8.0，250mM NaCl，2mMCa2+，50%甘油。
酶液反復凍融穩(wěn)定性：反復凍融5次，無活性損失。
運輸穩(wěn)定性：藍冰保溫運輸，穩(wěn)定。
6.產品優(yōu)勢
特異性：特定的蛋白酶，切割前面含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸 (DDDDK)。
純度高：不含其他蛋白酶，無非特異性切割。
無動物源性：重組生產，無外源性的病毒污染，生產過程不使用任何動物源原料。
質量穩(wěn)定：批量生產，可保證穩(wěn)定連續(xù)的批次生產；產品批次間無差異，質量穩(wěn)定。
符合法規(guī)要求：生產設備和生產環(huán)境符合相關法規(guī)要求，生產過程完全遵循NSF ISO 9001:2015質量體系并符合GMP指導原則。
質量文件完整：按客戶需求，可提供相關法規(guī)支持文件。
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